典型实验室常用缓冲液配置方案

　实验室常用缓冲液配置方案

　 1)1 M Tris-HCl (, , ) 组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：

　 称量 g Tris 置于1 L 烧杯中。

　 加入约800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　 按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值。

　PH值

　浓 HCl

　约70ml

　约60ml

　约42ml

　 将溶液定容至1 L。

　 高温高压灭菌后，室温保存。

　注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的 pH 值大约降低个单位。

　2)10×TE Buffer(, , ) 组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法：

　 量取下列溶液，置于1 L 烧杯中。

　1M Tris－HCl Buffer（，，）

　100ml

　500mM EDTA()

　20ml

　 向烧杯中加入约800 ml 的去离子水，均匀混合。

　 将溶液定容至1 L 后，高温高压灭菌。

　 室温保存。

　3) M Tris-HCl () 组份浓度： M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：

　 称量 g Tris 置于1 L 烧杯中。

　 加入约800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　 用浓盐酸调节 pH 值至。

　 将溶液定容至1 L。

　 高温高压灭菌后，室温保存。

　注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的 pH 值大约降低个单位。

　4)3 M 醋酸钠() 组份浓度：3M 醋酸钠 配制量：100ml 配制方法：

　称量 NaAc·3H 2 O 置于100-200ml 烧杯中，加入月40ml 的去离子水搅拌溶解 加入冰醋酸调节 pH 值至 加去离子水将溶液定容至100ml

　4高温高压灭菌后，室温保存。

　5)PBS Buffer 组份浓度：137 mM NaCl, mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L 配制方法：

　 称量下列试剂，置于1 L 烧杯中。

　NaCl

　8g

　KCl

　Na2 HPO4

　KH 2PO4

　 向烧杯中加入约800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　 滴加浓盐酸将 pH 值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

　 高温高压灭菌后，室温保存。

　注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和 mM MgCl2。

　6)10 M 醋酸铵 组份浓度：10 M 醋酸铵

　配制量：100 ml 配制方法：

　 称量 g 醋酸铵置于100～200 ml 烧杯中，加入约30 ml 的去离子水搅拌溶解。

　 加去离子水将溶液定容至100 ml。

　 使用 mm 滤膜过滤除菌。

　 密封瓶口于室温保存。

　注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

　7) 苯酚/ 氯仿/ 异戊醇(25 : 24 : 1) 配制方法：

　 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊

　醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

　 配制方法：将 Tris-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

　8 ）10 ％ (W/V) SDS 组份浓度：10％ (W/V)SDS 配制量：100ml 配制方法：

　称量10g 高纯度的 SDS 置于100-200ml 烧杯中，加入约80ml 的去离子水，68℃加入溶解 滴加浓盐酸调节 pH 值至 将溶液定容至100ml 后，室温保存。

　9 ）2 N NaOH 组份浓度：2 N NaOH 配制量：100 ml 配制方法：

　 量取80 ml 去离子水置于100～200 ml 塑料烧杯中（NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

　 称取8 g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

　 待 NaOH 完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。

　 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

　10 ） N HCl 组份浓度： N HCl 配制量：100 ml 配制方法：

　 在 ml 的去离子水中加入 ml 的浓盐酸（ N)，均匀混合。

　 室温保存。

　11 ）5 M NaCl 组份浓度：5 M NaCl 配制量：1 L 配制方法：

　 称取 g NaCl 置于1 L 烧杯中，加入约800 ml 的去离子水后搅拌溶解。

　 加去离子水将溶液定容至1 L 后，适量分成小份。

　 高温高压灭菌后，4℃保存。

　11 ）20 ％ (W/V) Glucose 组份浓度：20％ (W/V) Glucose 配制量：100 ml 配制方法：

　 称取20 g Glucose 置于100～200 ml 烧杯中，加入约80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。

　 加去离子水将溶液定容至100 ml。

　 高温高压灭菌后，4℃保存。

　12 ）SolutionI( 质粒提取用) 组份浓度：25 mM Tris-HCl（), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量：1 L 配制方法：

　 量取下列溶液，置于1 L 烧杯中。

　1M Tris-HCl（）

　25ml

　 EDTA（）

　20ml

　20 ％Glucose（

　M）

　dH 2 O

　910ml

　 高温高压灭菌后，4℃保存。

　 使用前每50 ml 的 Solution I 中加入2 ml 的 RNase A（20 mg/ml)。

　13 ）SolutionII( 质粒提取用) 组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS 配制量：500ml 配制方法：

　量取下列溶液，置于500ml 烧杯中 10％ SDS 50ml 2N NaOH 50ml 加灭菌水定容至500ml，充分混匀 室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意：SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌

　14 ）SolutionIII( 质粒提取用) 组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量：500 ml 配制方法：

　 称量下列试剂，置于500 ml 烧杯中。

　KOAc

　 147g

　CH 3 COOH

　 加入300 ml 去离子水后搅拌溶解。

　 加去离子水将溶液定容至500 ml。

　 高温高压灭菌后，4℃保存。

　15 ） M EDTA() 组份浓度： M EDTA 配制量：1 L 配制方法：

　称取 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L 烧杯中。

　 加入约800 ml 的去离子水，充分搅拌。

　 用 NaOH 调节 pH 值至（约20 g NaOH)。

　注意：pH 值至时，EDTA 才能完全溶解。

　 加去离子水将溶液定容至1 L。

　 适量分成小份后，高温高压灭菌。

　 室温保存。

　16 ）1 M DTT

　组份浓度：1 M DTT 配制量：20 ml 配制方法：

　 称取 g DTT，加入到50 ml 塑料离心管内。

　 加20 ml 的 M NaOAc（)，溶解后使用 mm 滤器过滤除菌。

　 适量分成小份后，-20℃保存。

　17 ）10 mM ATP 组份浓度：10 mM ATP 配制量：20 ml 配制方法：

　 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml 塑料离心管内。

　 加20 ml 的25 mM Tris-HCl（)，搅拌溶解。

　 适量分成小份后，-20℃保存。

　一.常用贮液与溶液

　1mol/L 亚精胺（Spermidine）: 溶解 亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

　1mol/L 精胺（Spermine）：溶解 精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

　10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate）：将 乙酸胺溶解于水中，加

　水定容至1L 后，用孔径的滤膜过滤除菌。

　10mg/ml 牛血清蛋白(BSA）：加100mg 的牛血清蛋白（组分 V 或分子生物学试剂级，无 DNA 酶）于 水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

　1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g 的原装瓶中加 水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg 的二硫苏糖醇 至微量离心管，加 的水配制成1mol/L 二硫苏糖醇溶液。

　8mol/L 乙酸钾（potassium acetate）：溶解 乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

　1mol/L 氯化钾（KCl）：溶解 氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

　3mol/L 乙酸钠（sodium acetate）：溶解 的三水乙酸钠于约90ml 水中，用冰乙酸调溶液的 pH 至，再加水定容到100ml。

　 EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（），混合后形成 EDTA 的三钠盐。或称取 的 Na2EDTA·2H2O 和20g的 NaOH，并溶于水中，定容至1L。

　1mol/L HEPES：将 溶于约90ml 的水中，用 NaOH 调 pH（），然后用水定容至100ml。

　1mol/L HCl：加 的浓盐酸至 的水中。

　25mg/ml IPGT：溶解250mg 的 IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份贮存于-20℃。

　1mol/LMgCl2:溶解 MgCl2·6H2O 于足量的水中，定容到100ml。

　100mmol/L PMSF：溶解174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。

　20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：将200mg 的蛋白酶 L 加入到水中，轻轻摇动，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

　10mg/mlRnase（无 DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg 的胰蛋白 RNA 酶于1ml 的10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH ）。溶解后于水浴中煮沸15min，使 DNA 酶失活。用1mol/L 的 Tris－HCl 调 pH 至，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）

　5mol/L 氯化钠（NaCl）：溶解 氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

　10N 氢氧化钠（NaOH）：溶解400g 氢氧化钠颗粒于约 水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

　10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS 慢慢转移到约含 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

　2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解 山梨（糖）醇于足量水中

　使终体积为100ml。

　100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA 的试剂瓶中加入100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）

　％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg 的 X－gal于1ml 的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

　100×Denhardt 试剂（Denhardt"s regent）

　成分及终浓度

　配制100ml 溶液各成分的用量

　2 ％ 聚 蔗 糖（Ficoll，400型）?2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）?2％BSA（组分V）?水

　2g?2g?2g?加水至总体积为100ml

　依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

　10×标准 DNA 连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）

　成分及终浓度

　配制10ml 溶液各成分的用量

　 Tris-HCl?100mmol/L MgCl2?100mmol/L DTT?2mmol/L ATP?5mmol/L 盐酸亚精胺（可选） BSA（组分 V）（可选）?水

　5ml 1mol/L 贮液?1ml 1mol/L 贮液?1ml 1mol/L 贮液?200ul 100 mmol/L 贮液?50ul 1 mmol/L 贮液 10 mg/mL 贮液

　 将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。

　100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）

　可以购买到100mmol/L 纯 dNTPs 贮液，-80℃可贮存至少6个月。

　10mmol/L dNTP 混合液

　成分及终浓度

　配制20ul溶液各成分的用量

　10mmol/L dATP?10mmol/L 2ul 100 mmol/L dATP 贮液?2ul 100 mmol/L dCTP 贮液?2ul 100 mmol/L dGTP 贮液?2ul 100 mmol/L dTTP 贮液?12ul

　dCTP?10mmol/L dGTP?10mmol/L dTTP?水

　20％PEG NaCl

　成分及终浓度

　配制10ml 溶液各成分的用量

　质 量 浓 度 为20％聚乙二醇 氯化钠?水

　20g?50ml 5 mol/L 氯化钠 或 固体氯化钠?补足100ml

　 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

　20×SSC

　成分及终浓度

　配制1L 溶液各成分的用量

　300mmol/L 柠 补足1L

　檬酸三钠（二水）?3mol/L 氯化钠?水

　 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约 水中，加几滴10N NaOH溶液调 pH 为，用水补足体积至1L。

　DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的体积分数为％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的 DEPC失活。DEPC 会与胺起反应，不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。

　甲酰胺（deionized formamide）

　直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

　磷酸缓冲液（phosphate buffer）

　按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g 于足量水中，使终体

　积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g 于足量水中使终体积为1L。

　1mol/L 磷酸二氢钠（ml）

　1mol/L 磷酸氢二钠（ml）

　最终 pH 值

　877?850?815?775?735?685?625?565?510?450?390?330?280

　123?150?185?225?265?315?375?435?490?550?610?670?720

　TE（用于悬浮和贮存 DNA）

　成分及终浓度

　配制100ml 溶液各成分的用量

　10mmol/L Tris －HCl?1mmol/L EDTA?水

　1ml 1mol/L Tris-HCl（，25℃）?200ul mol/L EDTA（pH ）

　Tris 缓冲液（Tris-HCl buffer）

　将121g 的 Tris 碱溶解于约 水中，再根据所要求的 pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（），用水调整终体积至1L。

　浓盐酸的体积（ml）

　pH

　二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

　电泳缓冲液

　50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

　成分及终浓度

　配制1L 溶液各成分的用量

　2mol/L Tris 碱?1mol/L 乙 酸?100 mmol/L EDTA?水

　 ml 的冰乙酸（ mol/L）?200ml 的 mol/L EDTA（pH ）?补足1L

　5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

　成分及终浓度

　配制1L 溶液各成分的用量

　445 mmol/L Tris 碱 ?445 mmol/L 硼 酸盐?10 mmol/L EDTA?水

　 硼酸?20 ml 的 mol/L EDTA（pH ）?补足1L

　染料

　1％溴酚蓝（bromophenol blue）

　加1g 水溶性钠型溴酚蓝于100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

　1％二甲苯青 FF（xylene cyanole FF）

　溶解1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到100ml。

　10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide）

　小心称取1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

　凝胶上样液（gel loading solutions）

　6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

　成分及终浓度

　配制10ml 溶液各成分用量

　 N 氢氧化钠?6 mmol/L 300ul 10N 氢 氧 化 钠 ?120ul EDTA（）补足到10ml

　EDTA?18％聚蔗糖（400型）％溴甲酚绿％二甲苯青 FF?水

　6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

　成分及终浓度

　配制10ml 溶液各成分用量

　 ％ 溴 酚 蓝％二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?15％聚蔗糖（400型）?水

　 1％溴酚蓝 1％二甲苯青 FF?100ul EDTA（）补足到10ml

　6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

　成分及终浓度

　配制10ml 溶液各成分用量

　 ％ 溴 酚 蓝％二甲苯青FF?15 ％ 聚 蔗 糖 1％溴酚蓝 1％二甲苯青 补足到10ml

　（400型）?水

　6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

　成分及终浓度

　配制10ml 溶液各成分用量

　 ％ 溴 酚 蓝％二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?50％甘油?水

　 1％溴酚蓝 1％二甲苯青 FF?100ul EDTA（）

　6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

　成分及终浓度

　配制10ml 溶液各成分用量

　 ％ 溴 酚 蓝％二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?40％聚蔗糖?水

　 1％溴酚蓝 1％二甲苯青 FF?100ul EDTA（）?4g?补足到10ml

　 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

　成分及终浓度

　配制10ml 溶液各成分用量

　％溴酚蓝％二甲苯青 FF?200 mmol/L ％SDS?50％甘油?水

　20mg?20mg?4ml EDTA()?100ul 10％ SDS?5ml?补足到10ml

　三.常用培养基

　LB培养基 将下列组分溶解在 水中：

　蛋白胨

　10g

　酵母提取物

　5g

　氯化钠

　10g

　如果需要用1N NaOH（～1ml）调整 pH 至，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

　SOB 培养基 将下列组分溶解在 水中：

　蛋白胨

　20g

　酵母提取物

　5g

　氯化钠

　1 mol/L 氯化钾

　 用水补足体积到1L。分成100ml 的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁。

　SOC 培养基 成分、方法同 SOB 培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用的滤膜过滤除菌）。

　TB培养基 将下列组分溶解在 水中：

　蛋白胨

　12g

　酵母提取物

　24g

　甘油

　4ml

　各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml 灭菌的170mmol/L mol/L K2HPO4 的 溶 液 （ 的 KH2PO4 和溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用的滤膜过滤除菌）。

　2×YT培养基 将下列组分溶解在 水中：

　蛋白胨

　16g

　酵母提取物

　10g

　氯化钠

　4ml

　如果需要用1N NaOH（～1ml）调整 pH 至，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

　YPD 培养基 将下列组分溶解在 水中：

　蛋白胨

　20g

　酵母提取物

　10g

　葡萄糖

　20g

　用水补足体积为1L 后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加 色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g 琼脂粉。

　四.常用抗生素

　氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

　溶解1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。

　羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

　溶解 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

　溶解1g 甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以 终浓度与100ug/ml 氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

　卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

　溶解100mg 卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。

　氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

　溶解250mg 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以～25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。

　链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

　溶解 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。

　萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）

　溶解50mg 萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。

　四环素（tetracyyline）（10mg/ml）?溶解100mg 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

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